Preparação de amostras
Em geral, uma amostra que é preparada para autorradiografia deve ser completamente seca para minimizar a atenuação da emissão beta. O procedimento de colocar uma amostra ou mancha molhada em embalagem plástica deteriora gravemente a sensibilidade e a resolução, principalmente ao usar isótopos de baixa energia (ex.: 35 S), e eliminará totalmente a detecção efetiva de 3 H. Além disso, é importante que qualquer material de mancha usado em um experimento tenha a máxima afinidade pela biomolécula que passou pelo processo de mancha; ex.: nylon com carga positiva para um ácido nucleico. A escolha adequada de membrana garante que a radioatividade fique próxima da superfície (definindo um lado ativo da mancha), que pode ser colocada mais perto do filme e do fósforo para maximizar a sensibilidade e a resolução espacial.
A garantia de que uma mancha consiga ser removida e reanalisada após a secagem para autorradiografia é um aspecto importante. Em geral, se as moléculas que passaram pelo processo de mancha estão interligadas adequadamente à membrana, e a mancha está devidamente bloqueada e analisada, a remoção e reanálise após a secagem não são afetadas negativamente.
A definição operacional simples de “seco naturalmente” é suficiente para ser usada com a BioMax TranScreen; já a menor umidade pode causar uma grave aderência e/ou problemas de estática se uma mancha for exposta à superfície de um filme. A superfície da BioMax TranScreen consegue resistir ao efeito adverso que água e/ou gelo normalmente teria no fósforo.
Câmara escura e luzes de segurança
IMPORTANTE: O filme BioMax MS é extremamente sensível às luzes verde, amarela e azul, e apenas deve ser exposto a filtro de luz de segurança vermelho GBX-2, com lâmpada de 7,5 ou 15 watts. O uso de outros filtros de luz de segurança ou de lâmpadas de maior potência causará um aumento significativo no desfoque do plano de fundo no filme exposto. Consulte as instruções e precauções fornecidas com o filme. A BioMax TranScreen é resistente à exposição à luz por períodos indefinidos. Além disso, o período de emissão de luz após a exposição ao fósforo é suficientemente curto (segundos), de forma a garantir que não haja precauções especiais envolvendo a adaptação da tela ao escuro.
Instruções de uso do sistema BioMax TranScreen
ETAPA 1. Sob condições adequadas da câmara escura, remova o filme da caixa e insira-o na pasta da BioMax TranScreen. A pasta da Biomax TranScreen foi desenvolvida para ajudar a minimizar o desfoque do filme devido a condições ruins da câmara escura. Consulte a seção sobre câmara escura e luzes de segurança para obter mais informações sobre as condições adequadas da câmara escura.
ETAPA 2. Coloque o lado ativo da amostra na superfície de fósforo da pasta conforme mostrado no diagrama.
ETAPA 3. Coloque a combinação de filme/tela em um cassete e feche o cassete.
ETAPA 4. Em seguida, o cassete deve ser colocado em um freezer (-60 a -80 °C). É importante usar o freezer para maximizar a sensibilidade do sistema.
ETAPA 5. Após a exposição, deixe o cassete alcançar a temperatura ambiente por, no mínimo, 15 minutos antes da abertura. Isso ajudará a evitar danos às dobradiças do cassete e minimizará a formação de condensação de água no filme, na amostra e na tela BioMax TranScreen expostos.
ETAPA 6. Sob condições de câmara escura adequadas, abra o cassete e desmonte a combinação criada. A pasta da BioMax TranScreen é dentada em um dos lados para facilitar o acesso ao filme.